蛋白質(zhì)磷酸化是生物界 普遍,也是 重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,20世紀50年代以來(lái)一直被生物學(xué)家看作是一種動(dòng)態(tài)的生物調節過(guò)程。在細胞中,大概有1/3的的蛋白質(zhì)被認為是通過(guò)磷酸化修飾的。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾與多種生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān),如DNA損傷修復、轉錄調節、信號傳導、細胞凋亡的調節等。磷酸化蛋白質(zhì)及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過(guò)程的機理,進(jìn)一步認識生命活動(dòng)的本質(zhì)。近年來(lái)隨著(zhù)蛋白質(zhì)組技術(shù)的不斷發(fā)展,蛋白質(zhì)磷酸化的研究越來(lái)越受到廣泛的關(guān)注。
蛋白質(zhì)磷酸化在細胞信號轉導中的作用
磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質(zhì)磷酸化過(guò)程的必不可少的工具,因此研究蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化反應并確定成熟簡(jiǎn)便的合成路線(xiàn)就變得非常重要。目前為止,多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹(shù)脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進(jìn)行磷酸化;單體法則是將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,這種方法較后磷酸化法操作更為簡(jiǎn)便,已經(jīng)成為多肽磷酸化修飾的主要方法。
單體法修飾時(shí),磷酸化的氨基酸由于側鏈修飾的較大基團產(chǎn)生的位阻而導致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會(huì )比較困難,尤其在含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾時(shí),合成將變得異常困難,并且 終產(chǎn)物成分復雜,難以分離,產(chǎn)率極低。因此,當肽鏈中多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化時(shí),可以考慮采用后磷酸化法,其合成過(guò)程主要就是在多肽合成結束之后,選擇性的脫去要標記氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進(jìn)行反應。側鏈保護基在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時(shí),可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,然后在過(guò)氧酸條件下氧化生成磷酰基,完成反應。
我們提供多肽進(jìn)行兩個(gè),三個(gè),四個(gè),五個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾的高質(zhì)量多肽。擁有成熟的合成純化技術(shù),不斷進(jìn)取的精英團隊,合生生工已經(jīng)成為值得信賴(lài)的多肽供應品牌。
成功案例:
序列NH2-TERD(pS)D(pT)DVE****PPGRPAEVH***AQPFGFID(pS)D(pS)DA***Y-CONH2,四個(gè)磷酸化修飾位點(diǎn)。
HPLC分析:
MS分析: