熒光修飾可以通過(guò)共價(jià)鍵的形式連接在多肽序列的N端或C端,但是更推薦在N端進(jìn)行修飾。 以下為合生生物常用熒光 修飾以及發(fā)光顏色。
熒光修飾可以通過(guò)共價(jià)鍵的形式連接在多肽序列的N端或C端,但是更推薦在N端進(jìn)行修飾。 以下為合生生物常用熒光
修飾以及發(fā)光顏色。
熒光標記肽結合成像技術(shù)后可用于識別特定靶點(diǎn)。共聚焦或熒光顯微鏡的體外成像仍然是研究細胞內各種生物過(guò)程和相 互作用十分有效的方法之一。與蛋白質(zhì)不同,這些肽定位于肌動(dòng)蛋白上的特定靶點(diǎn),不易聚集蛋白質(zhì),因此非常適合于 體外跟蹤。同樣,FITC標記的CPP也可被用于細胞內組分的成像,且其細胞毒性低。 其中,FITC 是一種胺活性的熒光染料,可廣泛的用于標記多肽和蛋白質(zhì)。合生生物在N端標記Fitc,都會(huì )建議在后面一 個(gè)氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer)如氨基己酸(Ahx)。鏈接切割 需要酸性環(huán)境,在N端標記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素,通常會(huì )伴有后面一個(gè)氨基酸的去除,但當有一個(gè) 間隔器如氨基己酸,或者是通過(guò)非酸性環(huán)境將目的肽從樹(shù)脂上切下來(lái)時(shí),這種情況可避免。空間位阻被認為是在熒光染 料前使用Ahx的主要原因,而不是為什么FITC不能直接偶聯(lián)在多肽上的原因。 下圖是合生生物經(jīng)典案例之一:
熒光標記肽結合成像技術(shù)后可用于識別特定靶點(diǎn)。共聚焦或熒光顯微鏡的體外成像仍然是研究細胞內各種生物過(guò)程和相 互作用十分有效的方法之一。與蛋白質(zhì)不同,這些肽定位于肌動(dòng)蛋白上的特定靶點(diǎn),不易聚集蛋白質(zhì),因此非常適合于 體外跟蹤。同樣,FITC標記的CPP也可被用于細胞內組分的成像,且其細胞毒性低。
熒光標記肽結合成像技術(shù)后可用于識別特定靶點(diǎn)。共聚焦或熒光顯微鏡的體外成像仍然是研究細胞內各種生物過(guò)程和相
互作用十分有效的方法之一。與蛋白質(zhì)不同,這些肽定位于肌動(dòng)蛋白上的特定靶點(diǎn),不易聚集蛋白質(zhì),因此非常適合于
體外跟蹤。同樣,FITC標記的CPP也可被用于細胞內組分的成像,且其細胞毒性低。
其中,FITC 是一種胺活性的熒光染料,可廣泛的用于標記多肽和蛋白質(zhì)。合生生物在N端標記Fitc,都會(huì )建議在后面一 個(gè)氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer)如氨基己酸(Ahx)。鏈接切割 需要酸性環(huán)境,在N端標記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素,通常會(huì )伴有后面一個(gè)氨基酸的去除,但當有一個(gè) 間隔器如氨基己酸,或者是通過(guò)非酸性環(huán)境將目的肽從樹(shù)脂上切下來(lái)時(shí),這種情況可避免。空間位阻被認為是在熒光染 料前使用Ahx的主要原因,而不是為什么FITC不能直接偶聯(lián)在多肽上的原因。
其中,FITC 是一種胺活性的熒光染料,可廣泛的用于標記多肽和蛋白質(zhì)。合生生物在N端標記Fitc,都會(huì )建議在后面一
個(gè)氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器(alkyl spacer)如氨基己酸(Ahx)。鏈接切割
需要酸性環(huán)境,在N端標記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素,通常會(huì )伴有后面一個(gè)氨基酸的去除,但當有一個(gè)
間隔器如氨基己酸,或者是通過(guò)非酸性環(huán)境將目的肽從樹(shù)脂上切下來(lái)時(shí),這種情況可避免。空間位阻被認為是在熒光染
料前使用Ahx的主要原因,而不是為什么FITC不能直接偶聯(lián)在多肽上的原因。
下圖是合生生物經(jīng)典案例之一:
合成FITC-Ahx-RAKWNNTLKQIASK的MS&HPLC圖譜
對于較長(cháng)的序列,建議使用 FRET pairs (fluorescence resonance energy transfer pairs)進(jìn)行修飾。 熒光共振能量轉移(FRET)是描述兩個(gè)熒光團之間的能量轉移的機制。由于FRET效率部分基于供體和受體分子之間的 距離,因此該技術(shù)通常用于研究酶效率,蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用或其他分子動(dòng)力學(xué)。
對于較長(cháng)的序列,建議使用 FRET pairs (fluorescence resonance energy transfer pairs)進(jìn)行修飾。
熒光共振能量轉移(FRET)是描述兩個(gè)熒光團之間的能量轉移的機制。由于FRET效率部分基于供體和受體分子之間的 距離,因此該技術(shù)通常用于研究酶效率,蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用或其他分子動(dòng)力學(xué)。
熒光共振能量轉移(FRET)是描述兩個(gè)熒光團之間的能量轉移的機制。由于FRET效率部分基于供體和受體分子之間的
距離,因此該技術(shù)通常用于研究酶效率,蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用或其他分子動(dòng)力學(xué)。
圖1.蛋白酶研究的FRET機制。
(當肽保持完整時(shí),受體分子將淬滅供體分子,并且不會(huì )檢測到熒光。如果序列被蛋白酶活性切割,則受體將不再淬滅 供體,并且將檢測到熒光信號)
(當肽保持完整時(shí),受體分子將淬滅供體分子,并且不會(huì )檢測到熒光。如果序列被蛋白酶活性切割,則受體將不再淬滅
供體,并且將檢測到熒光信號)
FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具,由于其反應過(guò)程可被連續監測,為酶活性的檢測提供了一個(gè)便捷的方法。 供體/受體對的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當FRET肽是完整的,表現出的是內部的熒光猝 滅,但當供體/受體對的任何肽鍵斷裂就會(huì )釋放出熒光,此熒光可被連續檢測,從而可對酶的活性進(jìn)行定量分析。 FRET 肽可作為各類(lèi)酶研究的合適底物,比如:
FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具,由于其反應過(guò)程可被連續監測,為酶活性的檢測提供了一個(gè)便捷的方法。 供體/受體對的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當FRET肽是完整的,表現出的是內部的熒光猝 滅,但當供體/受體對的任何肽鍵斷裂就會(huì )釋放出熒光,此熒光可被連續檢測,從而可對酶的活性進(jìn)行定量分析。
FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具,由于其反應過(guò)程可被連續監測,為酶活性的檢測提供了一個(gè)便捷的方法。
供體/受體對的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當FRET肽是完整的,表現出的是內部的熒光猝
滅,但當供體/受體對的任何肽鍵斷裂就會(huì )釋放出熒光,此熒光可被連續檢測,從而可對酶的活性進(jìn)行定量分析。
FRET 肽可作為各類(lèi)酶研究的合適底物,比如:
1. 肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動(dòng)力特征和功能特征。 2. 對新的蛋白水解酶的篩選和檢測。 3. 對多肽折疊的構象研究。
1. 肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動(dòng)力特征和功能特征。
2. 對新的蛋白水解酶的篩選和檢測。 3. 對多肽折疊的構象研究。
2. 對新的蛋白水解酶的篩選和檢測。
3. 對多肽折疊的構象研究。
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